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技术专家
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2020年初,随着新型冠状病毒疫情在全球各地爆发,世界卫生组织(WHO)将此疫情定性为大流行。时至今日,尽管全球疫情防控取得了一定的成果,但新冠病毒仍在变异,疫情不断反复、传播持续蔓延。近日全国各地本土疫情的出现,又给人们敲响了防控不可松懈的警钟。人类是否能早日战胜这一疫情大流行?疫苗的问世给人们带来了一线曙光。

 

目前全球已有12款疫苗获批上市。分别由美国(辉瑞、莫德纳、强生)、德国、英国(阿斯利康)、俄罗斯(伽马利亚研究所、Vector研究中心)、中国(国药、科兴、康希诺)和印度(巴拉特)药企研发,多数疫苗需接种两剂。疫苗的种类为传统的灭活病毒疫苗、腺病毒载体疫苗和mRNA疫苗。

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传统的灭活病毒疫苗和腺病毒载体疫苗大家都比较熟悉了,像国内接种的科兴、国药或者康希诺,就属于灭活疫苗或腺病毒载体疫苗。mRNA疫苗则相对陌生一些,它打破了传统灭活、减毒疫苗的免疫激活模式,创新性地利用人体本身细胞生产抗原,以此激活特异性免疫。mRNA疫苗的保护率极高,能达到90%。在研发上,mRNA疫苗能够快速地更新迭代以应对不断出现的变异毒株,且生产过程短,只需要60-70天。对于新型冠状病毒疫苗的研制,除了抗原设计外,选择合适的载体也是至关重要的。

 

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疫苗佐剂能够帮助机体对免疫原产生有效、持久的免疫应答,是疫苗中不可或缺的部分。英国及美国上市疫苗在大规模接种过程中发生过几次不良过敏反应,经深入研究后,有专家认为PEG(聚乙二醇)是出现过敏反应的源头。由此看出关键原材料、辅料中的杂质残余极可能影响制剂质量属性的关键要素。2020年8月国家药监局药审中心发布《新型冠状病毒预防用疫苗研发技术指导原则(试行)》及新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则(试行)等5个指导原则。在指导原则中明确规定应明确制剂处方中每种组分的作用及含量,提供佐剂、缓冲液、盐浓度、pH值以及其他辅料的选择依据。

 

目前获批上市的疫苗佐剂多数集中在微小颗粒或纳米颗粒,包括铝盐、乳剂、脂质体和病毒载体。

 

脂质体主要由磷酸类脂、胆固醇、硬脂胺等组成的单层或多层双分子夹水结构,可包裹多种疫苗,并有效地将抗原送至细胞对应靶点。其作用机制与铝佐剂相似,具有储存库效应,并可以增强抗原递呈细胞(APC)对抗原的摄入。

 

由上述介绍可以看出,大部分佐剂都没有紫外吸收,CAD电雾式检测器较传统紫外检测器、ELSD检测器等有着独特的优势,分析物既不需要发色团也不需要离子化,适用于不挥发及半挥发化合物的高灵敏度检测。

 

Vanquish Flex & CAD!

 

CAD检测器有更高的灵敏度、更宽的线性范围、更好的重现性成为新冠mRNA疫苗质量控制的首选。本实验利用Vanquish Flex液相色谱系统和Charged Aerosol Detector H电雾式检测器来分析疫苗中的佐剂。

 

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仪器配置:

Vanquish Flex系列

 

泵:Binary Pump F VF-P10-A(S/N:8306835)

自动进样器:Split Sampler FT VF-A10-A(S/N:1004811)

柱温箱:Column Compartment H VH-C10-A(S/N:6300969)

检测器:Charged Aerosol Detector H(S/N:8318615)

 

色谱条件:

 

分析柱:Acclaim 300 C18 150×2.1mm,3.0um (PN:060264 )

柱 温:50℃(配主动预热)

CAD检测器:过滤常数:3.6s,雾化温度:50℃,采集频率:5Hz

流速=0.4ml/min

进样量:10µL

 

色谱图:

 

4.png系统适用性色谱图

(点击查看大图)

 

实验结果与讨论:

 

PEG(聚乙二醇)、Chol(胆固醇)、DSPC(二硬脂酰磷脂酰胆碱)以及两种自制佐剂在0.25 µg/ml~50 µg/ml范围内线性良好,相关系数R2 >0.999。本方法五种组分检测限为0.125 ppm(S/N=3),定量限为0.25 ppm(S/N=10)。

 

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定量限色谱图

(点击查看大图)

 

由实验结果可知,本方法利用CAD电雾式检测器直接检测疫苗中的脂质体载体,无需进行前处理,灵敏度高,分离度和重复性好。

样品前处理简单,样品经纯化水稀释后可直接进样分析。

 

6.png制剂样品色谱图

(点击查看大图)

 

 

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